Título: Estudio de la expresión genética en genes implicados en la diabetes mellitus tipo 2
Autora: Tania Sesar Zaragoza
Tutor: Félix Gilgado Barbadilla
Modalidad: Científico-Tecnológico: Ciencias de la salud
Área curricular: Biomedicina
Centro: C Mare de Déu del Carme
Localidad: Tarragona
Objetivos:
Mis objetivos iniciales para el trabajo eran investigar más a fondo el funcionamiento de la diabetes tipo 2, a parte también aprender a trabajar correctamente en un laboratorio y emplear y estudiar diferentes técnicas que se emplean en la investigación y finalmente saber interpretar unos resultados obtenidos y llegar a una conclusión.
Hipótesis:
Es posible que 10 genes implicados en procesos de autofagia en las células estén implicados en la diabetes mellitus tipo 2, ya que cuando estos procesos no funcionan correctamente desarrollan enfermedades como la diabetes.
Proceso:
Para la parte experimental de este trabajo se han seleccionado diez genes relacionados con la autofagia, para ver la diferencia de expresión génica de estos entre ratones sanos y ratones diabéticos, y así comprobar si están implicados.
Partiendo de las muestras de ratón, se extrajo el material genético, en forma de RNA, de las células para poder empezar la investigación de los genes seleccionados.
Después de haber extraído el RNA de las células este fue cuantificado con la ayuda de un espectrofotómetro. Con una pipeta se extraía parte de la muestra y se colocaba en el expectrofotómetro y el programa lo cuantificaba, esto se hizo con cada una de las muestras.
El siguiente paso fue pasar del material genético en forma de RNA a cDNA, se retrotranscribe una hebra de ARN en ADN complementario (ADNc) usando una enzima llamada transcriptasa inversa o transcriptasa reversa, y el resultado se amplifica mediante una PCR real time.
Como último paso en el laboratorio se preparó la placa para hacer la PCR-RT, se añadió en una placa de 384 pocillos las diferentes muestras que se tenía de los individuos, es decir el cDNA, junto con los diferentes oligos.
Los diferentes oligos y el cDNA de los diferentes individuos fue colocado en la placa, donde cada columna es una muestra de cDNA y cada fila un oligo, el cual esta repetido en tres filas para un mayor número de datos los cuales nos darán más información y fiabilidad de los resultados:
Conclusiones:
Finalmente, a partir de los datos obtenidos y de la información, podemos observar que los genes DOR y LC3 están alterados, en los individuos sanos estos genes están en una mayor expresión que el los individuos manipulados genéticamente, es decir los individuos obesos/ diabéticos que los presentan en menor cantidad. Con estos resultados se puede deducir que estos genes intervienen en la diabetes mellitus tipo 2 y en la obesidad. Estos resultados son muy satisfactorios ya que conocer los genes que están alterados en los individuos enfermos es de gran ayuda en la investigación de la diabetes ya que estos genes alterados podrían ser dianas terapéuticas.
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